非同位素标记法检测人染色体端粒长度

doi:10.3969/j.issn.1004-616x.2001.01.001

癌变·畸变·突变 ›› 2001, Vol. 13 ›› Issue (1): 1-004.doi: 10.3969/j.issn.1004-616x.2001.01.001

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非同位素标记法检测人染色体端粒长度

许丽艳1, 李恩民2, 沈忠英1,蔡唯佳1, 沈　健

11 汕头大学医学院病理学教研室, 广东　汕头　515031; 21 汕头大学医学院生物化学与分子生物学教研室, 广东　汕头　515031

收稿日期:2000-04-03 修回日期:2000-05-29 出版日期:2001-01-30 发布日期:2001-01-30
通讯作者: 沈忠英1

A NONRADIO - LABELLED METHOD ASSAYS TO MEASURE THE TELOMERE LENGTH OF HUMAN CHROMOSOME

XU Li - yan, LI En - min, SHEN Zhong - ying, etat

Pathological Department, Medical College of Shantou University, Shantou 515031, China

Received:2000-04-03 Revised:2000-05-29 Online:2001-01-30 Published:2001-01-30

摘要/Abstract

摘要： 目的:建立一种非同位素标记测定端粒长度的方法。方法:以地高辛标记寡核苷酸(CCCTAA) 3 为探针,对基因组DNA 进行Southern 杂交,NBT/ BCIP 显色后与DNA 标准分子量比较,图象分析系统测定端粒长度。结果:通过严格控制探针的工作浓度(1 :1 280 稀释) 、DNA 上样量( > 20μg) 、杂交温度(47 ±2 ℃) 等主要影响因素,获得了比较好的杂交条带。结论:建立了一种稳定、可靠、低背景的地高辛标记检测端粒长度的方法。

关键词: 端粒, 端粒长度, 非同位素标记

Abstract: Purpose : To establish a nonradio - labelled method for measuring telomere length (mean length of telomere rest riction f ragment , TRF) of human chromosome. Methods : TRF was examined by Southern blotting by using labelled oligonucleotide (CCCTAA) 3 probe with digoxin. After hybridization , the blot was stained with NBT/ BCIP , analysed by using a densitomet ric imaging system and mean length of TRF calculated , comparing with standard kilobase sized marker. Results : The hybridization bands were showed under st ringently cont roling the prode working concent ration (1 :1 280 dilution) , loaded DNA sample ( > 20μg) and hybridization temperature (47 ±2 ℃) Conclusion : A digoxin - labelled , stable , reliable and low background method for determining the telomere length of human chromosome was established.

Key words: telomere, telomere rest riction f ragment, nonradio - label

中图分类号:

许丽艳, 李恩民, 沈忠英, 蔡唯佳, 沈　健. 非同位素标记法检测人染色体端粒长度[J]. 癌变·畸变·突变, 2001, 13(1): 1-004.

XU Li - yan, LI En - min, SHEN Zhong - ying, etat. A NONRADIO - LABELLED METHOD ASSAYS TO MEASURE THE TELOMERE LENGTH OF HUMAN CHROMOSOME[J]. Carcinogenesis, Teratogenesis & Mutagenesis, 2001, 13(1): 1-004.

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